Как приготовить градиенты плотности, чтобы добиться воспроизводимости при очистке образцов методом ультрацентрифугирования?

Логотип spINSIGHTS

Ультрацентрифугирование в градиенте плотности (DGUC) — это широко известная методика разделения частиц высокого разрешения на основе разной плавучей плотности. Чтобы добиться оптимального результата, требуется тщательное приготовление градиентов плотности. Приготовление их вручную может быть достаточно сложным и трудоемким. По этой причине часто бывает целесообразно охарактеризовать качество и профиль градиента плотности, чтобы гарантировать надлежащее разделение образцов во время ультрацентрифугирования.

Приготовление градиента плотности

Приготовление градиента плотности

Градиенты плотности обычно создают путем последовательного наслоения одного раствора на/под другой в порядке увеличения или уменьшения плотности. Ступенчатый градиент можно использовать напрямую. Также с помощью контролируемой диффузии можно получить непрерывный градиент.

Практический опыт и аккуратные манипуляции, исключающие перемешивание, позволят вам готовить качественные градиенты плотности для удовлетворения конкретных требований методики разделения.


Характеризация градиентов плотностиХарактеризация градиентов плотности

Подтверждение того, что градиент плотности имеет надлежащий профиль, — это важный предварительный этап, гарантирующий правильное разделение образцов впоследствии. Градиенты подвергают фракционированию различными методами, включая ручное или автоматическое пипетирование и слив через дно пробирки.

Характеризацию и оптимизацию профилей градиентов до и после центрифугирования можно осуществлять путем измерения плотности, показателя преломления и поглощения излучения (например, в ультрафиолетовой и видимой областях спектра) по отдельности или в сочетании друг с другом в зависимости от природы градиента.

Использование и хранение приготовленных градиентов

Использование и хранение приготовленных градиентов После приготовления градиентов и определения их характеристик наступает последний этап — ультрацентрифугирование. Со временем происходит диффузия градиентов, и если этот процесс не контролировать, результаты могут быть неудовлетворительными или несогласующимися. В связи с этим градиенты лучше всего использовать как можно скорее после приготовления. В качестве альтернативы, при условии оптимизации состава градиенты можно хранить дольше при пониженной температуре.

Заключение

При осторожном обращении и тщательном приготовлении можно легко получать высококачественные градиенты, определять их характеристики и использовать для очистки образцов с высоким разрешением с помощью метода ультрацентрифугирования в градиенте плотности. 

Заполните форму ниже, чтобы связаться с нами