Почему метод аналитического ультрацентрифугирования (AUC) оптимален для характеризации аденоассоциированных вирусных векторов (AAV)?

Логотип spINSIGHTS

Применение аденоассоциированных вирусов (AAV) - актуальное направление развития методов генной терапии. Их характеризация и контроль качества как лекарственных средств приобретает критическое значение для контролируемого производства и безопасности пациентов. В частности, особый интерес вызывает определение количественного соотношения полных, пустых и неполных капсид. Для решения такой задачи аналитическое ультрацентрифугирование (AUC) — золотой стандарт, который позволяет получить данные более высокого разрешения, чем другие методы.

Анализ AAV с помощью AUC

Характеризация AAV высокого разрешения — ультрацентрифуга Optima AUCХарактеризация AAV с высоким разрешением

Особенностью препаратов AAV является возможная вариативность генетической нагрузки в их частицах. При этом необходимую функцию способны выполнять только векторы, содержащие полный целевой генетический материал. Поэтому очистка AAV и выделение целевой фракции, содержащей только полные вирионы, имеет критическое значение.

Кроме того, определение количественного соотношения функциональных (полных) и нефункциональных (пустых/неполных) капсид имеет первостепенное значение для оптимизации процесса культивирования, понимания факторов стабильности производства, определения дозировки и обеспечения безопасности пациентов.

Аналитическое ультрацентрифугирование: уникальный метод

Аналитическое ультрацентрифугирование: уникальный метод Аналитическое ультрацентрифугирование (AUC) - уникальный метод характеризации частиц различной природы. При AUC частицы разделяются в зависимости от их коэффициентов седиментации (S), учитывающих совокупность таких параметров, как размер, масса, форма и плотность.

Поскольку вирусные векторы с различной генетической нагрузкой отличаются по массе и плотности, AUC превосходно подходит для получения данных высокого разрешения о популяциях AVV в растворе без использования матрицы, а следовательно и без возможных побочных эффектов в результате такого взаимодействия.

AUC обеспечивает данные более высокого разрешения

Метод AUC получил широкое распространение как золотой стандарт количественной оценки качества и полноты частиц AAV. Например, если сравнивать с ионообменной хроматографией, AUC обеспечивает гораздо более высокое разрешение и четкую идентификацию популяции неполных капсид в тех случаях, когда ионообменная хроматография не справляется с задачей.

Методики анализа с использованием AUC применимы не только для контроля качества готового препарата, но и для оптимизации культивирования клеток с целью увеличения выхода полных капсид.

AUC обеспечивает данные более высокого разрешения

Анализ пустых (E), полных (F) и неполных (P) частиц AAV с агрегатами (X) с помощью методов ионообменной хроматографии (A) и AUC (B). Воспроизведено с разрешения Wang et al.

Заключение

AUC позволяет получить данные высокого разрешения об образцах AAV и определить количественное содержание пустых, полных и неполных капсид, а также агрегатов. Нажмите здесь, чтобы узнать подробную информацию о методе AUC и новых функциях аналитической ультрацентрифуги Optima AUC.

† Wang et al. (2019). Mol Ther Methods Clin Dev, 15, 257-263. DOI: 10.1016/j.omtm.2019.09.006
Только для исследовательских целей. Не предназначено для диагностики in vitro.

Заполните форму ниже, чтобы связаться с нами