Applications of Ultracentrifugation in Purification and Characterization of Biomolecules

Content Type: Poster
Akash Bhattacharya,1 Ross VerHeul,2 Eric Von Seggern,1 Stephen Otts,2 Beckman Coulter, Inc., 1Loveland, CO & 2 Indianapolis, IN, USA

Introduction

Ultracentrifuges spin samples with centrifugal forces typically spanning 100,000 – 1,000,000 x g. At these high forces, the constituent molecules in the sample separate based on their physical properties (e.g., size, mass, density, anisotropy). Accordingly, ultracentrifugation is commonly used to purify, as well as characterize, low-molecular weight polymers up to multi-megaDalton protein complexes and organelles.

Preparative Ultracentrifugation

Preparative Ultracentrifugation 

Differential Ultracentrifugation

  1. Particles are separated on the basis of their size and mass (sedimentation coefficient, S).
  2. Multiple pelleting steps may be used for iterative enrichment.
  3. Ideal for separating particle groups of very different sizes.

 

Density Gradient Ultracentrifugation (DGUC) 

Density Gradient Ultracentrifugation (DGUC)

  1. Soluble particles are separated in a liquid column of varying density (density gradient)..
  2. In r ate zonal experiments, p articles migrate at varying rates, dictated by their S-values, and are time-dependent.
  3. Isopycnic separations are time-insensitive, where particles migrate to their apparent buoyant density in the gradient.
  4. Ideal for high-resolution separation of small materials with similar physical properties.

 

Example Workflow for DGUC Purification of Plasmid DNA

  1. Plasmid DNA may be extracted from bacteria using a variety of methods..
  2. The workflow below depicts a common alkaline lysis extraction and purification via a cesium chloride (CsCl) density gradient method with ethidium bromide.
  3. Newer density gradient materials (i.e., iodixanol/OptiPrep) and DNA-interacting probes (e.g., DAPI & GelGreen) may also be used in plasmid purification.

 

Example Workflow for DGUC Purification of Plasmid DNA 

 

CENT-4959PST02.19

Свяжитесь с нами

















Я согласен получать информацию о продукции, вебинарах, товарах и услугах компании Beckman Coulter, включая также информацию о продукции, товарах и услугах аффилированных компаний.



Добровольно предоставляя нам свои персональные данные с целью рассылки информации рекламного характера, вы соглашаетесь с тем, что в силу специфики Интернета, ваши данные могут быть переданы за пределы границ Российской Федерации. Настоящим вы признаете и соглашаетесь, что такие персональные данные могут быть переданы из места вашего действительного нахождения в офисы и на серверы Beckman Coulter Inc., ее аффилированных лиц, агентов и поставщиков услуг, которые могут находиться в Европейском Союзе, Соединенных Штатах Америки и других странах. В случае передачи данных в страну, чьи законы, применимые к осуществляемым на Сайте операциям, не обеспечивают эквивалентную защиту данных, Beckman Coulter Inc. предпримет все меры, чтобы обеспечить надлежащий уровень защиты таких персональных данных в соответствии с настоящим согласием. Ознакомьтесь с нашей политикой конфиденциальности и политикой в отношении персональных данных.