Гибкая автоматизация ИФА на лабораторной станции Biomek i5

Сводная информация

  • Автоматизированный рабочий процесс ИФА
  • Модифицированные дозирующие модули избавляют от необходимости иметь планшетный вошер
  • Всегда достаточное количество новых наконечников благодаря вместительному столу

Иммуноферментный анализ (ИФА) является распространенным аналитическим средством обнаружения присутствия белка или других молекул. Несмотря на то, что рабочий процесс в целом остается неизменным (рисунок 1), многочисленные этапы промывки и добавления реагентов делают его достаточно трудоемким. Автоматизация этих этапов может не только сократить трудозатраты, но и обеспечить получение более воспроизводимых результатов. На нижеприведенном рисунке продемонстрирована система автоматизации ИФА IL-22 (R&D Systems) на Biomek i5 (рисунок 2A).

Процесс проведения ИФА для автоматизации на Biomek i-5 

Рисунок 1. Рабочий процесс твердофазного ИФА IL-22

Рабочий стол Biomek i5 позволяет максимально использовать имеющееся пространство, например, для размещения достаточного количества новых наконечников (рисунок 2B); кроме того, предусмотрена возможность интеграции устройств, необходимых для проведения твердофазного ИФА, в частности, шейкеров, планшетных вошеров и планшетных ридеров. Мы использовали Biomek i5 для серийного разведения стандарта IL-22 в планшете в трёх повторностях для построения калибровочной кривой. Этапы инкубирования проводились на интегрированном настольном орбитальном шейкере. Точный контроль переноса жидкостей позволил нам полностью удалить все образцы, реагенты и буферы из лунок без использования вошера. Чтобы гарантировать отсутствие значительных остатков жидкости после аспирации в 300 мкл из каждой лунки была произведена аспирация небольшого дополнительного объёма в 4 точках по краю плоскодонных лунок. Это позволило автоматизировать этап, на котором в ручной методике обычно переворачивают на салфетку, чтобы избавиться от остатков жидкости.

Внешний вид Biomek i5 Span-8 (A) и один из возможных вариантов расстановки рабочего стола для проведения ИФА (B)

Рисунок 2. Внешний вид Biomek i5 Span-8 (A) и один из возможных вариантов расстановки рабочего стола для проведения ИФА (B)

В таблице 1 показана воспроизводимость значений в трех повторностях — все коэффициенты вариации (CV) составляют менее 5 %. Такая высокая сходимость результатов говорит о высокой точности дозирования Biomek i5.

мкг/мл IL-22
Средн. поглощение Коэффициент вариации (CV)
1000 2.568 4.1%
500 1.539 0.4%
250 0.820 2.3%
125 0.441 2.2%
62.5 0.236 2.4%
31.25 0.137 1.1%
15.625 0.089 4.1%
0 0.043 4.9%

Таблица 1. Коэффициент вариации при серийном разведении стандарта IL-22

На рисунке 3 приведена полученная калибровочная кривая с линейностью 0,991, что показывает высокую точность серийных разведений.

Калибровочная кривая полученая при постановке ИФА на Biomek i5 

Рисунок 3. Калибровочная кривая полученая при постановке ИФА на Biomek i5. Линейность составила 0,991. Показано стандартное отклонение в повторах.

Эти данные отражают воспроизводимость, которой можно добиться за счет автоматизации ИФА на Biomek i5 Span-8. Здесь мы продемонстрировали только построение калибровочной кривой по 24 образцам. Полностью 96-луночный планшет можно обработать за 6,5 ч, при том, что стадии инкубации занимают в общей сложности 4,5 ч. Чтобы добиться более высокой производительности, в которой может возникнуть необходимость, например, при скрининге клонов, экспрессирующих антитела, можно проводить инкубацию вне станции или использовать многоканальный канальный дозирующий модуль, позволяющий дозировать до 1мл каждым из 96-и каналов. Применение функции мультидиспенсирования позволяет значительно ускорить работу с несколькими планшетами. Большей автономности анализа можно добиться интегрировав дополнительные хранилища планшетов и расходных материалов, а также планшетного ридера. Таким образом, можно свести к минимуму вероятность ошибки и время, которое Вы тратите на раскапывание.

 

Автоматизированные лабораторные станции Biomek не предназначены и не утверждены для диагностики заболеваний или других состояний. Данные, представленные в настоящем документе, были получены в процессе разработки.

Свяжитесь с нами













Я согласен получать информацию о продукции, вебинарах, товарах и услугах компании Beckman Coulter, включая также информацию о продукции, товарах и услугах аффилированных компаний.



Заполняя данную форму вы соглашаетесь с нашей политикой конфиденциальности и политикой в отношении персональных данных.