Характеризация вирусных векторов
Разработка средств доставки генетического материала в клетки - актуальная задача клеточной и генной терапии. Многие специалисты выбирают в качестве такого средства аденоассоциированные вирусы (AAV), поскольку их капсиды можно модифицировать для транспортировки молекул, обладающих с терапевтическим свойствами.
Векторы на основе рекомбинантных аденоассоцированных вирусов (rAAV) открывают многоообещающие перспективы в области генной терапии.
Однако исследователи обязательно должны определять, какая доля вирусных капсидов является интактной и сколько интактных вирусных капсидов являются полными. Это играет решающее значение для успеха терапии.
Вирусные частицы, которые не содержат полного целевого терапевтического гена, вряд ли будут оказывать терапевтическое действие. Вместо этого эти неполные капсиды могут вызывать нежелательные реакции, такие как иммуногенный ответ.
Классические методы анализа вирусных частиц в растворе, например, динамическое светорассеяние (ДРС) или высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), можно использовать для определения таких характеристик rAAV, как гетерогенность и агрегация. Однако они не обладают достаточным разрешением для количественной оценки гомогенности и нагрузки вирусных частиц. При создании векторных препаратов на основе rAAV для клинического применения, достижение высокого разрешения измерений всегда вызывает трудности.
Как известно исследователям в области генной терапии, когда на ранних этапах разработки продукта ставки очень высоки, быстрое получение отрицательного результата приобретает особую важность. В отличие от других технологий, внедрение аналитического ультрацентрифугирования позволяет создавать векторы rAAV для клинического применения.
Каково главное препятствие? Отсутствие метода количественного определения с высоким разрешением для контроля терапевтического качества с учетом:
- Гомогенности;
- Чистоты;
- Консистенции продукта;
- Целостности вириона.
Идеальное решение: анализ в растворе методом аналитического ультрацентрифугирования (AUC).
Как выяснили исследователи из компании Genethon, благодаря возможности проведения безматричного анализа векторных препаратов на основе rAAV независимо от серотипа и трансгена AUC позволяет:
- Определять состояние или гомогенность вирусного микросообщества;
- Проводить эмпирический количественный анализ агрегации;
- Определять загрязнение субчастицами;
- Проводить количественный анализ массы для точной оценки генетической полезной нагрузки.
Просмотрите этот вебинар и узнайте, как Кристин Ле Бек из компании Genethon и ее исследовательская группа успешно применяли аналитическое ультрацентрифугирование для изучения характеристик векторов scAAV и ssAAV — в частности, определяли гомогенность и нагрузку вирусных частиц.
Аналитическая ультрацентрифуга для характеризации вирусных векторов
Optima AUC
Аналитическая ультрацентрифуга Optima AUC нового поколения часто используется для контроля качества вирусных векторов и определения нагрузки капсидов аденоассоциированных вирусов.