Характеристики

Флуорохром DRAQ7 применим во многих приложениях и совместим с протоколами, реализованными в широком диапазоне инструментов.

  • Быстрое окрашивание дцДНК/ядер мертвых или пермеабилизованных клеток.
  • Распознавание мертвых/живых клеток при комбинации с красителями живых клеток.
  • Простота применения: не требуются промывки и использование РНКаз.
  • Идеален для применения с GFP/FITC-метками. DRAQ7 испускает дальний красный свет.
  • Отлично подходит для контрастирующей окраски ДНК при использовании методов иммунофлуоресценции/иммуногистохимии и анализе сложных объектов и клеток

Спектральные характеристики:

  • Длины волн флуоресценции лежат в диапазоне от 665 нм до дальней инфракрасной области
  • Оптимальные эмиссионные фильтры - 695LP, 715LP или 780 LP
  • По оптическим свойствам совместим с настольными поточными и лазерными сканирующими цитометрами, а также с эпифлуоресцентными конфокальными микроскопами без использования Уф-излучения.
  • Возбуждение светом с субоптимальными длинами волн 488 нм, 568 нм и 633 нм и светом с оптимальной длиной волны 647 нм. В отличие от пропидиум йодида для возбуждения не требуется УФ.
  • В ходе проточной цитометрии не требуется компенсации при совместном использовании с популярными комбинациями флуорохромов FITC/GFP + PE. Можно комбинировать со многими красителями живых клеток.
  • Возможность многоцветной визиулизации/цитометрии при комбинации с флуорохромами, испускающими свет в УФ и видимом диапазоне
  • При связывании с ДНК не наблюдается усиления флуоресценции
  • В обычных условиях не происходит фотообесцвечивания

Спектральный профиль:

На графиках ниже показаны стандартные спектры поглощения и флуоресценции водного раствора флуорохрома DRAQ7. Как видно из графиков, DRAQ7 можно эффективно возбуждать светом с длиной волны 488 нм. В этом случае рекомендуется использовать длинноволновой полосовой фильтр, чтобы собрать максимально возможное число испускаемых фотонов.

Возбуждение:

  • Оптимальные длины волн: 633 нм и 647 нм (λmaxвозб = 599/644 нм)
  • Субоптимальные длины волн: 488 нм, 514 нм и 568 ни (только при проточной цитометрии)
 

Испускание:

  • от 655 нм до инфракрасного света с длиной волны более 800 нм (λmaxисп = 678/694 нм при интеркаляции в ДНК)
  • минимальное перекрытие с видимым излучением GFP и FITC
  • Совместим с эмиссионными фильтрами 695LP, 715LP, 725 BP 20 или 780 LP

Флуорохром DRAQ7 способен проникать и окрашивать только клетки с поврежденной мембраной.

На точечных диаграммах ниже отображены результаты поточной цитометрии апоптирующих клеток линии Jurkat человека, экспонировавшихся в 0.1-2.0 мкМ растворе стауроспорина в течение 24 ч, по сравнению с отрицательным контролем.

Флуорохром DRAQ7 можно использовать в поточной цитометрии для выявления клеток с поврежденной мембраной в сочетании с такими реагентами, как Аннексин V, митихондриальные зонды, и другими репортерами жизнеспособности клеток. Красители ДНК, не проникающие в живые интактные клетки, как правило, используют совместно с репортером инверсии мембранных фосфолипидов аннекисном V, что позволяет исследовать за процесс апоптоза.

Как видно на рисунках ниже, флуорохром DRAQ7 (верхний и средний ряды) выполняет функцию, эквивалентную функции пропидиум йодида (PI, нижний ряд), помогая определять концентрацию VP-16, при которой происходит нарушение целостности мембраны. Кроме того, новые возможности открывают такие свойства DRAQ7, как испускание дальнего красного света и отсутствие усиления флуоресценции при связывании с ДНК. Используя логарифмические и линейные шкалы, можно идентифицировать дополнительные дискретные субпопуляции клеток. Также, в отличие от PI, DRAQ7 позволяет параллельно измерять несколько параметров флуоресценции, например 4 параметра при возбуждении голубым лазером.

Флуорохром DRAQ7 можно использовать для анализа апоптоза, цитотоксичности, жизнеспособности и тестирования цитолитических антител.

Благодаря излучению дальнего красного цвета, DRAQ7 можно комбинировать со многими другими флуорохромами. Например, при использовании в качестве источника возбуждения аргон-ионного лазера с длинной волны 488 нм, можно одновременно использовать до 4 флуорохромов.