Краситель DAPI для определения жизнеспособности клеток

4’,6-диамидино-2-фенилиндол (DAPI) - синий флуоресцентный краситель для окрашивания нуклеиновых кислот. Он связывается с двуцепочечной ДНК, взаимодействуя с AT-кластерами в малой бороздке молекулы. В комплексе с ДНК флуоресценция DAPI в 20 раз сильнее.

Спектральные свойства DAPI делают его очень удобным для определения жизнеспособности на проточном цитометре, оборудованном ультрафиолетовым или фиолетовым лазером. Длина волны возбуждения красителя составляет 358 нм, длина волны максимума излучения - 461 нм.

Плазматическая мембрана практически непроницаема для DAPI, поэтому он чрезвычайно плохо окрашивает живые клетки. Если же мембрана повреждена, краситель проникает в клетку и связывается с ДНК.

В рекомендуемых условиях флуоресценция окрашенных мертвых клеток возбуждается фиолетовым лазером и детектируется в диапазоне длин волн 425-475 нм. DAPI можно использовать совместно с красителями, возбуждаемыми другими лазерами.

Апоптотические, некротические и/или поврежденные клетки – источник помех при анализе жизнеспособности методом проточной цитометрии. DAPI позволяет окрасить нежизнеспособные клетки, оценить их количество и исключить соответствующие данные, в то время как живые клетки останутся неокрашенными (негативными).