Эффективность Cell Cycle Kit

Для получения надежных результатов измерений количества ДНК необходимо определять коэффициент вариации пика G0/G1. Оптимальным считается значение коэффициента вариации ниже 3%, а CV выше 6% на неопухолевый клеточных линиях считается неприемлемым (Darzynkiewicz и соавт.). Основными источниками ошибок являются методика пробоподготовки образца клеток, методика окрашивания, а также этап анализа на проточном цитометре.

Одним из источников вариации считается непостоянный доступ окрашивающего реагента к ядерной ДНК. Фиксация клеток формальдегидом и окрашивание без отмывок обеспечивают надежный результат, удовлетворяющий требованиям автоматизированных алгоритмов анализа клеточного цикла. Из-за перекрывания между G1 и начальной S-фазой, а также перекрывания G2/M и поздней S фазы ручной анализ данных клеточного цикла является затруднительным, а полученные результаты могут варьироваться в зависимости от оператора и вносимой человеческой ошибки. Различное программное обеспечение для анализа данных проточной цитометрии предлагает алгоритмы, автоматизирующие анализ клеточного цикла. Данные, показанные на гистограмме ниже получены с помощью алгоритма JV Watson, одного из двух алгоритмов анализа клеточного цикла, включенного в программное обеспечение Kaluza Analysis* версии 2.0.

 

Данные, подтверждающие эффективность реагента Cell Cycle Kit

(B) n=10 G1, % S, % G2/M, %
Среднее 43,63 40,00 16,37
Стандартное отклонение 2,17 2,11 0,61
Коэффициент вариации, % (CV) 5,0 5,3 3,7

Однопараметрический анализ клеточной линии Jurkat.(A) Данные, полученные после окрашивания образца клеток с помощью реагента Cell Cycle Kit. (B) Сводная таблица, объединяющая данные нескольких окрашиваний и измерений образцов клеток (n=10). Однопараметрический анализ клеточного цикла по содержанию ДНК с использованием оптимизированного протокола фиксации обеспечивает 1) отличное количество одиночных клеток, пригодных для анализа (около 70%), 2) отличное разрешение с CV для пика G0/G1 < 3% и 3) отличную воспроизводимость результатов анализа клеточного цикла с CV <5% для всех клеток интереса.

Pozarowski and Z. Darzynkiewicz. "Analysis of Cell Cycle by Flow Cytometry," Methods Mol Biol 281(2): 301-311, 2004.

*Только для научных исследований. Не для использования в диагностических целях.